黄熱病の蚊ネッタイシマカ幼虫におけるBacillus thuringiensis品種israelensisによって引き起こされる解剖学的損傷が顕微鏡で明らかになった

Jun 28, 2023

Scientific Reports volume 13、記事番号: 8759 (2023) この記事を引用

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メトリクスの詳細

単一距離位相回復アルゴリズム位相コントラストを使用したマイクロコンピュータ断層撮影技術により、Bti 処理後のネッタイシマカ 4 令幼虫の軟組織の強化レンダリング画像を再構成しました。 従来の顕微鏡法（光学顕微鏡または電子顕微鏡）に基づいたこれまでの出版物は、主に組織学的切片の形で部分的な研究に限定されていたのとは対照的に、今回我々は、昆虫の完全な内部解剖学的構造に対するBtiの効果を初めて示しました。 。 3D レンダリング画像を使用すると、組織や器官における細菌の影響を、切片だけでなく全体として研究することができました。 我々は、健康な幼虫の解剖学的構造と、Bti に曝露された後に (30 分、1 時間、および 6 時間) 幼虫に生じた変化を比較し、Bti が引き起こす進行性の損傷を観察しました。 中腸上皮への損傷が確認され、腸細胞の進行性の膨張、上皮の肥厚、空胞の増加、そして最終的には細胞溶解が起こり、中腸壁に開口部が生じた。 同時に、幼虫の運動性が変化し、表面張力を破って呼吸するために水面に上がって呼吸用サイフォンを適切に配置することが困難になりました。 内部では、浸透圧ショック現象が観察され、その結果、断面形状が変形し、キューティクルと内部構造の間に広い内部空間が出現し、気管幹が進行的に崩壊しました。 総合すると、これらの結果は、幼虫の死は、前述したような消化管上皮の破壊の結果としての飢餓によるものではなく、適切な栄養の欠如による窒息に加えて、相乗的な壊滅的な多因子プロセスによるものであることを示しています。ガス交換。

Bacillus thuringiensis (Bt) は、1901 年に石渡重胤によって、いわゆる「ソット病」（突然倒れる病気）の原因を調査中に死んだカイコ幼虫から細菌を単離して初めて発見されました。 彼はこの細菌を Bacillus sotto1 と名付けました。 数年後、エルンスト・ベルリナーは、チューリンゲン州の製粉工場で見つかった地中海小麦粉蛾の死骸から関連菌株を単離し、その後、この細菌を適切に B. thuringiensis と名付けました。 この著者は、結晶化した Bt 毒素の溶液が特定の作物の害虫に対して非常に効果的であることも観察しました 2,3,4。

Bt はグラム陽性の芽胞形成細菌であり、世界中でテストされたすべての生態系で見られます5。 Bt 株は胞子形成中に、多くの昆虫に有毒なδエンドトキシンと呼ばれる結晶 (Cry) および細胞溶解性 (Cyt) タンパク質毒素を傍胞子体として合成します 6,7。 昆虫の幼虫がこれらのタンパク質結晶を摂取すると、中腸のアルカリ性環境によって可溶化され、消化酵素によってプロトキシンが活性化され、消化管の細胞膜に孔が開き、昆虫にとって致命的な結果をもたらすことが示されています。 : 参考文献8、9。

殺虫剤としての Bt の最初の商業生産は 1938 年にフランスで報告され、「スポレーヌ」という名前で販売されました。それ以来、先進製品の開発における Bt の使用は継続的に増加しています 10。 アンガスは、カイコの幼虫 (Bombyx mori) と Bt 亜種ソットの株を使用して、Cry 毒素が主な殺虫剤であることを最初に証明しました 11。その後、腸上皮が δ 毒素の作用部位であることが実証されました。 -エンドトキシン12. 現在、Cry タンパク質は、さまざまな昆虫目の多様な種や、ダニや線虫などの他の無脊椎動物をターゲットにするためにテストされています 13。 Bt の自然界への無差別放出が生態系に長期的な影響を与えるリスクがあるかどうかについては長年の論争がある 14,15,16 が、その特異性と生分解性を考慮すると、Bt 製品は化学殺虫剤よりもはるかに優れた代替品と考えられています。 。

Bt 品種 israelensis (Bti) が分離されて以来、その傍胞子は (ブユやユスリカの幼虫に加えて) 蚊の幼虫に対して強い病原性作用を持ち 14,15、蚊の防除への使用と出版物の数は飛躍的に増加しました 16 。

その殺生物作用を可能にするメカニズムに関する研究は数多くありますが、解剖学的組織学的損傷を示した研究はほとんどありません17。 それにもかかわらず、黄熱病の蚊を含む数種類の蚊科の蚊の幼虫の中腸の組織病理学と Bti 毒素の病因が報告されています 18,19,20,21,22,23,24,25,26。 。

Bti による被害を評価するには、健康な幼虫の解剖学的構造と比較できることが重要です。 このテーマに関しては、Snodgrass による蚊の解剖学に関する古典的な研究 29 と Christophers による驚異的な編纂研究 30 から始まり、健康なネッタイシマカ幼虫の中腸の組織学的特徴付けを行った最近の研究 31 など、このテーマに関する研究がいくつかあります。

パラスポラル封入体がクサ科幼虫に対して強い病原性を有する Bt 株の単離 15 と特性評価 14 の後、ネッタイシマカにおける Bti の組織病理学的影響に関する細胞学的研究が始まりました 18,19。 Charles による先駆的な研究は、最初は光学顕微鏡 19、次に透過型電子顕微鏡 20 を用いて、組織レベル、主に消化管で Bti によって引き起こされる損傷を初めて実証しました。

従来の顕微鏡法（光学顕微鏡または電子顕微鏡）に基づいた以前の出版物は、主に組織学的切片の形での部分的な研究に限定されていたのとは対照的に、この研究では、マイクロCTのおかげで、内部の組織を示すことが可能になりました。 Bt処理された昆虫の全体的な解剖学が初めて明らかになった。 3D レンダリング画像を使用することで、切片の構造だけでなく全体の構造を研究することができ、健康な幼虫の解剖学的構造と、進行性の Bti に 30 分、1 時間、6 時間暴露した後に受けた変化を比較することで、 Bti が引き起こす損害についてはすでに説明されています。

この研究で使用した細菌株は、B. thuringiensis var. thuringiensis var. thuringiensis です。 israelensis 4Q5 (Bti 4Q5)、オハイオ州立大学のバチルス遺伝子ストックセンターより。 Bti 4Q5 を 50 ml の T3 培地 32 中で、30 ℃、好気条件 (200 rpm) で、完全な胞子形成が観察される (107 胞子/ml) まで 72 時間培養しました。 培養物を４０００ｇで２０分間遠心分離し、ペレットを３回洗浄し、５ｍｌのＭｉｌｌｉ－Ｑ水に再懸濁した（２２ｍｇ胞子結晶懸濁液／ｍｌ）。 得られた胞子および結晶懸濁液は、使用するまで 4 °C で保管しました。

到着後、卵を脱塩素処理した水道水と粉砕した市販のドライキャットフードの入ったガラス容器に入れました。 容器を昆虫室 (25 °C ± 2 °C、湿度 65%、光周期 16 時間:8 時間明:暗) でインキュベートしました。 このような条件下では、卵は 2 日以内に孵化しました。 必要に応じて猫の餌も与えられました。 ネッタイシマカの初期の 4 齢幼虫を Bti 4Q5 によるバイオアッセイに使用しました。 バイオアッセイに使用されなかった残りの幼虫は、飼育容器に漂白剤を加えることによって殺されました。

10 匹のネッタイシマカ幼虫を、10 ml の脱塩素水道水と乾燥キャットフードが入った 30 ml プラスチックチューブに入れ、前述と同じ条件下で昆虫室に保管しました。 前述のBti 4Q5の胞子および結晶懸濁液100マイクロリットルを幼虫に添加した。 プラスチックのパスツールピペットを使用して、２匹の幼虫を異なる時間（３０分、１時間、および６時間）で取り出し、５ｍｌの７０％エタノールが入ったプラスチックチューブに入れた。 時間経過後、幼虫を固定し、以下に記載するように顕微鏡断層撮影のために処理した。 30 分間の幼虫は生きていましたが、バイオアッセイの開始から 1 時間後と 6 時間後に取り出した幼虫は死亡していました。

顕微鏡断層撮影研究では、すでに 70% エタノールに保存されている 2 匹の幼虫を、Bti 曝露時間を増加させながら各バイオアッセイから採取し、エタノール濃度を増加させて (80%、90%、100%)、室温でそれぞれ 30 分間脱水しました。 スキャンする前に、幼虫を 100% 無水エタノール中 1% ヨウ素の溶液で 24 時間染色し、ヘキサメチルジシラザン (HMDS) に 12 時間浸し、一晩風乾しました。 標本は、スキャンして 0.2 ml エッペンドルフ チューブ (粘土で標本ホルダーに取り付けてあり、幼虫はデジタルで簡単に除去できる素材である Basotect® [化学会社 BASF が開発したメラミン樹脂発泡体]) で内部に固定しました 33 [図 2]。 1a]) またはナイロン釣り糸 (直径 200 μm) の先端にシアノアクリレートで接着し、スキャンプロセス中の空気冷却流によって引き起こされる動きを避けるためにプラスチックのストローで覆います (図 1b)。 SkyScan 1172 デスクトップ高解像度顕微鏡断層撮影装置をアップグレードして、Hamamatsu L702 (100/250) 線源と Ximea 11Mp カメラを備えたものを使用しました。 スキャン パラメーターは次のように設定されました。等方性ボクセル サイズ = 0.54 μm。 電源電圧 = 48 kV、電源電流 = 49 µA、画像回転ステップ = 0.53° (6 時間の幼虫の場合は 0.2)、180° 回転スキャン、フィルターなし。 幼虫の全長を捕捉できるようにするには、5 ～ 7 回の接続された特大スキャンを実行する必要がありました。 結果として得られた Tiff 画像は、David Paganin et al.34 によって説明されている単一距離位相検索アルゴリズムを使用して、最近の Bruker micro-CT の NRecon ソフトウェア (v.2.0.0.5) で再構成されました。これにより、軟組織の位相コントラスト再構成強化画像が可能になります。 。

4 齢ネッタイシマカ幼虫の矢状断面のマイクロ CT 3D レンダリング画像。 スキャンの準備ができたマウントされたサンプル（a、b）とエタノールで保存された幼虫（c〜e）。 B. thurigiensis var. への暴露後の変形 (d) israelensis (Bti) と赤い矢印 (e) でマークされた空のスペースが作成されます。 健康な幼虫を制御します (c、f、g)。 Bti へのさまざまな曝露時間後の幼虫 (d、e、h – k): 30 分 (d、e、h)、1 時間 (i、j)、6 時間 (k)。 前部中腸上皮と周囲の筋肉の詳細 (g、i)。 変形 (d) と作成された空隙 (e)、および中腸上皮の開口部の形で観察される Bti によって引き起こされる進行性の細胞溶解効果に注目してください。 腹部セグメントには番号が付けられています。 Fd 食物、Fme 前中腸上皮、Gc 胃盲腸、Mu 筋肉、Op 中腸上皮開口部、Pm 周栄養膜。

Bruker micro-CT の Skyscan ソフトウェア CTAnalyser v.1.20.8.0 が、主要な「クリーニング」プロセスに使用されました。 結果として得られた画像は、DataViewer v.1.6.0.0 (図 3 および 4 のスライスされたレンダリング画像を取得するために使用) で再配置され、CTvox v.3.3.1 を使用して図 3 および 4 の 3D レンダリング画像が取得されました。 前述の 1f–k および 2、および補足ビデオ S1 35。

消化管上皮の外表面を視覚化するための内部解剖学的構造を示す、4 齢ネッタイシマカ幼虫の矢状断面のマイクロ CT 3D レンダリング画像。 対照の健康な幼虫 (a) および Bti に 1 時間曝露した後の幼虫 (b)。 b では、Bti によって引き起こされた損傷に注目してください。これは、開口部と空きスペースの形で確認できます。

レンダリングされた幼虫のマイクロCT画像には、主要な解剖学的構造と器官が示されています（図1f〜kおよび2、および補足ビデオS1）。 したがって、頭、胸部、腹部の外部構造に加えて、脳、筋肉、脂肪体、消化管 (開口部、咽頭、食道、腹部、胃) などの内部の解剖学的詳細が詳細に表示されます。盲腸、中腸、直腸、および肛門開口部の位置）。 消化管の内部では、周囲の消化管膜と上皮層が見られます。 さらに、唾液腺、マルピーギ尿細管（図1f、h、j、2、3、4）、および脚の成虫椎間板（図2b、3c）がはっきりと見えます。

4齢のネッタイシマカ幼虫の矢状断面を含むマイクロCTスライスレンダリング画像は、組織顕微鏡技術を使用して文献で得られたものと同等であり、内部の解剖学的構造を示しています。 健康な幼虫を制御します (a)。 Bti へのさまざまな曝露時間後の幼虫 (b – d): 30 分 (b)、1 時間 (c)、および 6 時間 (d)。 中腸上皮の開口部、空胞の増加、および厚さの増加として観察される中腸細胞上皮の進行性の膨張の形で観察される、作成された空の空間とBtiによって引き起こされる細胞溶解効果に注目してください。 Fd 食物、Fme 前中腸上皮、Gc 胃盲腸、Mu 筋肉、Op 中腸上皮開口部、Pm 周栄養膜、Vc 空胞。

マイクロ CT スライス レンダリング画像。腹部の第 3 節 (a、c、e) および腹部第 5 節 (b、d、f、g) のレベルでの 4 齢ネッタイシマカ幼虫の断面図。 健康な幼虫を制御します (a、b)。 Bti へのさまざまな曝露時間後の幼虫（c – g）：30 分（c、d）、1 時間（e、f）、6 時間（g）。 Bti によって引き起こされる空隙と、中腸上皮の開口部、空胞の増加、中腸細胞上皮の進行性の膨潤 (厚さの増加として観察される)、および進行性の細胞溶解効果として観察される細胞溶解効果に注目してください。気管幹の虚脱。

Btiへの曝露後、幼虫は活動性が低下し、動作がますます遅くなり、酸素を摂取するために地表に上がる回数が減り、最終的には死亡するなど、不規則な行動をとりました。 この過程で、幼虫は徐々に柔らかくなり、弛緩していきます。 対照幼虫（図1c、f、2a、3a、4a、b）と比較すると、Btiへの曝露時間に応じて、進行性の変形が発生し、クチクラと内部構造の間に顕著な空隙が観察されました。 これらの変化は、立体双眼顕微鏡で見ることができ（図1d、e）、レンダリングされたマイクロCT画像でも明確に示されています（図1h、j、2b、3b、c、4c〜f）。 さらに、断面で見ると、平らな腹部を持つ未処理の幼虫（図4a、b）と比較して、Btiへの曝露後、断面がほぼ円形になることが明らかです（図4e、f） 。 並行して、対照幼虫と比較した場合（図1c、f、g、2a、3a、4a、b）、Btiによって引き起こされる進行性の細胞溶解効果は、液胞の増加および中腸細胞上皮の進行性の膨張として観察されます。 、中腸の壁に広範囲の開口部があり、厚さの増加が観察されます（図1i-k）。 これらの開口部は、中腸上皮の外表面が非常に目立つ中腸横スリットとして再構成されている 3D レンダリング画像 (図 2b) およびレンダリング画像の断面 (図 3c、図 3c) で観察できます。 d、4c–g)。 これらの開口部に加えて、中腸上皮細胞の空胞が見えます（図3d、4f、g）。 さらに、背側気管幹は通常の長方形の断面（図4a、b）から徐々に崩壊し、その内腔（図4e、f）が減少し、最終的にはほとんど区別できなくなります（図4g）。 Btiへの6時間の曝露後、分解は最大となり、幼虫は高度に分解された中腸上皮壁、液胞と開口部を含む細胞容積の増加、および完全に崩壊した気管幹を示しました（図1k、3d、4e–g）。

ここで観察された幼虫の移動に対する Bti の影響は、ヒトスジシマカ 26 およびネッタイシマカ 36 で以前に報告されています。

この研究で示されたマイクロ CT レンダリングされた 3D 画像は、古典的な解剖学的手法で得られた画像と同等です 33。 したがって、ネッタイシマカから得た 3D レンダリング画像により、Snodgrass 29 や Christophers 30 などの古典的な著作や、より最近の著作 19、20、21、26、31 のような古典的な著作で、Culicidae の蚊について以前に記載されている解剖学的構造と器官の同定が可能になります。 37、38、39。 これらの以前の論文に示されている組織学的画像でさえ、図1および2に示されているマイクロCTレンダリング画像に匹敵します。 さらに、得られるレンダリングされたマイクロ CT 画像の品質は、最近蚊の研究に使用されている光干渉断層撮影技術によって得られる画像よりもはるかに優れています 40。 私たちは以前、さまざまな昆虫の解剖学的構造を説明するために Micro-CT を使用しました33,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57。私たちが知る限り、この技術が宿主に対する病原体の影響を研究するために使用されたのは初めてです。

この研究で観察された中腸上皮の同様の分解は、Bti 毒素への曝露後の他の双翅目、特に蚊科の蚊で広く報告されています 18,19,20,22,23,24,25,26,28,37,39。 実際、ネッタイシマカにおける Bti による組織病理学的損傷の最初の組織学的証拠は、Charles & Barjac によって発表されました 19,20。彼は、最初の兆候がどのようにして中腸で最速の進化が起こるかを決定し、説明しました。 彼らは、毒素の添加から25分後に完全に溶解したが、その後の領域の細胞はこの段階ではあまり変化していないことを観察した。 前胃の細胞には変化が見られず、周囲栄養膜は観察可能な変化なく分泌され続けました。 Lüthy & Wolfersberger28 は、細胞内の組織病理学的変化が 5 ～ 10 分の時間枠内で非常に速く起こると報告しました。 これらは、Bti への曝露後 30 分で、顕著な開口部としてはっきりと見える中腸上皮壁の溶解を観察したため、我々の観察と完全に一致しています。 さらに、Clark37 は、Bti 曝露後、上皮細胞は細胞質の抽出、細胞体積の増加、分泌小胞および液胞を伴う劣化の様相を示すと記載しました。 要約すると、損傷は細胞の分離を伴う膜の穴と水疱で構成されており、これはBtiへの進行性曝露後にマイクロCTで観察されたものと完全に一致しています。

Bt によって生成される Cry タンパク質ファミリーと Cyt タンパク質ファミリーは両方とも、膜を変化させることによって異なる目の昆虫に対して活性を持っています。 具体的には、Cyt 毒素は膜脂質と直接相互作用し 6、昆虫細胞株の膜透過性に影響を及ぼしますが、Cry 毒素は受容体認識および結合後に細孔を形成することで細胞を殺し、コロイド浸透圧溶解による細胞死につながります 28,58。 私たちの研究では、Bti 4Q5 が 3 つの Cry 毒素 (Cry4Aa、Cry4Ba、および Cry11Aa) と 1 つの Cyt タンパク質 (Cyt1Aa) を生成し、Cyt2Ba、Cry1Ca、および Cry10Aa59 が生成される可能性があるため、両方のタイプの毒素の複合効果が観察されました。

巨視的な観点から見ると、Bti 曝露後、中腸の変化により浸透圧ショックが生じ、幼虫の体内に水が蓄積し、表皮と内部構造の間に空いた空間が生じ、ほぼ円形になる腹部の変形が観察されます。セクションで。

溶解と細胞死のさまざまなモデルとして近年仮定されているメカニズムに関係なく、現在、消化管の上皮壁の分解によって引き起こされる損傷が幼虫の死の主な理由と考えられています。 したがって、伝統的に、この腸の破壊は摂食の急速な停止と、それに続く不食による昆虫の死につながると考えられてきました59。 しかし、少なくともAeでは。 アジプチの場合、腸の機能不全と衰弱によって、これほど短期間に死に至ることはあり得ない。 さらに、アルカリ性の胃液が体液に放出され、pHが変化してアルカリ性になるため、腸膜が破壊されます。 昆虫では、これらの変化は神経系の機能に影響を及ぼし、麻痺を引き起こすことさえあることが示されています60。 これは私たちの観察と一致しています。 したがって、細胞の崩壊とそれに伴う器官の損傷、運動に影響を与える神経系の変化、そして極端な場合には麻痺は、水面に向かう幼虫の正常な動きと、ガス交換のための呼吸サイフォンの適切な位置を確実に損なう。 さらに、この研究で初めて観察された気管幹の虚脱は、ガス交換の正確な実行の困難などの要因の相乗効果により、確実に死を暗示していると考えられます。

マイクロ CT 技術の使用により、黄熱病の蚊種 A. aegypti の 4 齢幼虫の解剖学的構造を完全に再構築し、内部構造と器官の実際の位置を特定し、健康な幼虫の内部解剖学的構造を比較することができました。他の人は、異なる時間Btiに曝露され、被害の証拠を比較した後です。 詳細な 3D マイクロ CT レンダリング画像と補足ビデオ S1 も含まれています。 この研究は、ネッタイシマカの 4 齢幼虫の内部解剖学的構造を初めて完全にマイクロ CT で再構成したもので、中腸の上皮細胞 (腸細胞) の肥厚、外観など、Bti の作用によって引き起こされた損傷を示しています。 Btiへの曝露後数分で中腸に現れる開口部（穴とスリット）を生成する小胞（空胞）と細胞の分離。 これらの所見は、スライド上で観察された組織学的切片によって最初に説明され説明された現象と一致していた。 しかし、マイクロCTにより、幼虫の細部の高品質レンダリング画像を取得することができ、その一部は以前に光学顕微鏡で得られたものと同等ですが、幼虫の一部ではなく動物全体を見ることができ、まったく新しい画像が得られました。標本全体の 3D 構造の視点。

細胞溶解はさまざまな組織や器官を変化させ、腸からの胃液の放出によって血リンパの pH が変化する可能性があります。 これは神経系の正常な機能に影響を及ぼし、幼虫の運動性に既知の影響を与えると考えられます。 そうなると、幼虫が水面に到達し、水の表面張力を破るために呼吸用サイフォンを正しい位置に配置することが困難になります。 これらの要因と、Bti が浸透圧ショックを引き起こし、広範囲の空隙と背側気管幹の崩壊を引き起こすことがマイクロ CT で示されたという事実は、幼虫の死を、前述したような不死死ではなく確かに説明できるだろう。相乗的な壊滅的な多要素プロセスによるものです。 さらに、適切なガス交換の欠如により窒息が発生する可能性があります。 ここで使用されたアプローチと得られた結果は、さらなる研究に新たな展望を開き、マイクロ CT が昆虫の解剖学を研究するだけでなく、昆虫に対する昆虫病原体の病原性の影響を研究するための強力な方法論であることを証明します。

研究の過程で生成および分析されたデータセットは JA-T から入手できます。 合理的な要求に応じて。

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この論文は、アンダルシア大学研究革新省（スペイン）および研究プロジェクト「タンパク質ファージを介して得られた地中海ショウジョウバエ（Ceratitis capitata）に対して活性な Cry 毒素の変異体の特性評価」を通じた FEDER プログラムからの資金提供の恩恵を受けました。ディスプレイ技術」 (B-BIO-081-UGR18) および「インビトロタンパク質進化とファージ内のファージディスプレイ技術タンパク質による、ミツバチ外部寄生虫 Varroa 破壊因子に対する活性を持つ新しい Cry 毒素の探索」 (A-BIO-424-UGR20) 、スサナ・ヴィルチェス博士が率いる。 コンティヒ (ベルギー) の Bruker SkyScan のスタッフの有効性と迅速なサポート、ソフトウェアの絶え間ない改善、そして私たちが要求した新しいオプションの実装に感謝します。 この点で、私たちは特に Alexander Sasov (現在 NeoScan www.neoscan.com)、Stephan Boons、Xuan Liu、Phil Salmon、および Vladimir Kharitonov に感謝しています。 ネッタイシマカの卵と Bti 4Q5 株を提供してくださったカーディフ大学の Colin Berry 博士に感謝します。

グラナダ大学理学部動物学科、18071、グラナダ、スペイン

ハビエル・アルバ＝テルセドル

グラナダ大学理学部バイオテクノロジー研究所および生化学および分子生物学 I 部、18071、グラナダ、スペイン

スサナ・ヴィルチェス

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実験を考案し、設計した: SV Bti 曝露実験を実行した: SV。 サンプルの準備、マイクロ CT スキャン、レンダリング画像を取得するためのソフトウェア処理、図のプレート、および補足ビデオの準備: JA-T。 結果の分析と解釈: JA-T., SV 論文執筆: JA-T., SV

ハビエル・アルバ・テルセドールまたはスサナ・ヴィルチェスとの通信。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

補足ビデオ1.

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転載と許可

Alba-Tercedor, J.、Vilchez, S. 黄熱病の蚊ネッタイシマカ (L.) 幼虫における Bacillus thuringiensis 変種 israelensis によって引き起こされる解剖学的損傷が、マイクロコンピューター断層撮影法によって明らかになりました。 Sci Rep 13、8759 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s41598-023-35411-1

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受信日: 2023 年 1 月 13 日

受理日: 2023 年 5 月 17 日

公開日: 2023 年 5 月 30 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-35411-1

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